टेस्टोस्टेरोन का निर्माण एक जटिल steroidogenesis प्रक्रिया का हिस्सा है।इस प्रक्रिया की शुरुआत cholesterol से होती है।सरल रूप में इसे इस प्रकार समझ सकते हैं:
Cholesterol → Pregnenolone → कई मध्यवर्ती चरण → Testosterone
इस प्रक्रिया में कई एंजाइम और कोशिकीय संरचनाएँ शामिल होती हैं।
पुरुषों में Leydig cells तक पहुँचने वाला LH (Luteinizing Hormone) टेस्टोस्टेरोन उत्पादन को नियंत्रित करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है।
टेस्टोस्टेरोन बनने के बाद उसका कुछ हिस्सा सीधे अपने receptor पर कार्य करता है, जबकि कुछ हिस्सा दूसरे हार्मोन में परिवर्तित हो सकता है।
Testosterone से DHT और Estradiol टेस्टोस्टेरोन शरीर में मुख्य रूप से दो महत्वपूर्ण रास्तों से भी बदल सकता है:
Testosterone → DHT 
यह परिवर्तन 5-alpha reductase नामक enzyme की सहायता से होता है।
दूसरा रास्ता है:
Testosterone → Estradiol
इस प्रक्रिया को aromatization कहा जाता है और इसमें aromatase enzyme शामिल होता है।
इसलिए शरीर में टेस्टोस्टेरोन की भूमिका को केवल “रक्त में testosterone की संख्या” से समझना पर्याप्त नहीं है।